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實驗室組織細(xì)胞破碎總結(jié)分析

發(fā)布時間: 2019-10-10  點(diǎn)擊次數(shù): 2008次

實驗室組織細(xì)胞破碎總結(jié)分析如下:

1. 機(jī)械法 
  主要通過機(jī)械切力的作用使組織細(xì)胞破碎的方法,常用的器械有組織搗碎機(jī)、勻漿器、研缽和研磨、壓榨器等。
  1)組織搗碎機(jī) 一般用于動物組織、植物肉質(zhì)種子、柔嫩的葉芽等,轉(zhuǎn)速可高達(dá)10000rpm/M以上。由于旋轉(zhuǎn)刀片的機(jī)械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。
  2)勻漿器 勻漿器的研缽磨球和玻璃管內(nèi)壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離,破碎細(xì)胞的程度比組織搗碎機(jī)高。制作勻漿器的材料,除玻璃外,還可以用硬質(zhì)塑料、不銹鋼、人造熒光樹脂等。
  3)研缽 多用于細(xì)菌或其他堅硬植物材料,研磨時常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨劑,以提高研磨效果。
  4)細(xì)菌磨 是一種改良了的研磨器,比研缽具有更大的研磨面積,而且低部有出口。操作時先把細(xì)菌和研磨粉調(diào)成糊狀,每次加入一小勺,研磨20-30秒即可將細(xì)菌細(xì)胞*磨碎。
  2. 物理法 
  主要通過各種物理因素使組織細(xì)胞破碎的方法。在生化制備中常用的方法有:
  1)反復(fù)凍溶法 先將樣品深冷至-15---20度使之凍固,再緩慢的融化,反復(fù)多次,多用于動物性材料。
  2)急熱驟冷法 將材料投入沸水中,維持85-90分鐘,至水浴中急速冷卻,此法可用于細(xì)菌及病毒材料。
  3)超聲波處理 頻率一般選在10KC至200KC,功率200-500瓦范圍,處理時間有數(shù)分鐘至數(shù)十分鐘不等,處理過程中注意冷卻。此法多用于微生物材料。 
  3.化學(xué)及生物化學(xué)法
  有自溶法,酶解法和表面活性劑法等。
  1)自溶法 在一定PH和適當(dāng)?shù)臏囟认?,利用組織細(xì)胞內(nèi)自身的酶系統(tǒng)將細(xì)胞破碎的方法。此過程需較長時間,常用少量防腐劑如甲苯、*等防止細(xì)胞的污染。
  2)酶溶法 利用各種水解酶,如溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶、半纖維素酶、脂酶等,將細(xì)胞壁分解,使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來。有些細(xì)菌對溶菌酶不敏感,加入少量巰基試劑或8摩爾尿素處理后,使之轉(zhuǎn)為對溶菌酶敏感而溶解。
3)表面活性劑處理 如十二烷基硫酸鈉、*化十二烷基吡啶等。

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